试剂产品

2×GenRec 单段重组试剂盒是一款简单、快速、高效的单片段DNA定向克隆产品，本试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体在克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物5'端引入线性化克隆载体末端序列，使得插入片段PCR产物5'和3'最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列(20 bp～40 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合，在重组酶的催化下，仅需反应15-30 min即可进行转化，完成定向克隆。克隆阳性率可达90%以上。试剂盒中预混了重组酶和重组反应所需缓冲液，并添加了特殊成分，可显著提高重组克隆效率。


产品组成：

2×GenRec Master Mix

产品特点：

  • 简单高效的定向无缝克隆
  • 灵活的序列设计，无需考虑酶切位点
  • 无需PCR纯化步骤

产品说明

使用说明:

1、反应体系

注：如果不慎将液体粘在管壁，可通过短暂离心使其沉入管底。

片段添加量（ng）= 0.02×片段碱基对数（bp）（对应的片段浓度为0.03 pmol）

2、重组反应

  • 在冰上解冻2×GenRec Master Mix，颠倒混匀。
  • 在无菌管中加入载体和片段（按上述要求），用无菌水补足到10μL，最后加入10 μL 2×GenRec Master Mix，用移液器轻轻吸打混匀避免气泡产生。
  • 50℃恒温反应15-30min，在冰上放置3-5min

3、转化

  • 取化学转化感受态细胞于冰上解冻。
  • 取上述反应液10 μL加入到感受态细胞中充分混匀。冰浴10min。
  • 将离心管置于42℃水浴锅中热激90s，然后迅速放回冰上，使细胞冷却2～3min。
  • 向离心管中加入已预热的无菌LB(或SOC)培养液600μL，37℃恒温振荡培养45～60min。
  • 短暂离心弃上清，吸取100 μL的新鲜LB培养基重新悬浮，将菌液均匀涂布在含有适当抗生素的平板上。将平板倒置，于37℃过夜培养。

4、 克隆鉴定

菌落PCR。用无菌的枪头或牙签将单个菌落挑至20～50μL LB 培养基中混匀，直接取1μL作为PCR模板，使用2×Taq DNA Polymerase Master进性菌落PCR实验。

注意事项:

  • 为达到最优的重组效果，请保证体系中PCR片段和载体的质量，建议DNA样品A260/280>1.8，浓度>40ng/μl。
  • 当得到的PCR产物条带单一时，可无需纯化，产物可直接用于重组。
  • EDTA等金属离子螯合剂对该产品有抑制作用，必须保证反应体系中不含该类螯合剂。

产品内容

产品名称 目录号 规格 价格
2×GenRec 单段重组试剂盒 CL07010 10次 ￥375元
CL07020 20次 ￥625元
CL07050 50次 ￥1000元
说明书

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